Q&A-索码生物

Q:

什么是iPSC？

A:

人诱导多功能干细胞（iPSC）是通过重编程方法对已经高度分化的人体细胞进行重新转分化得到的多能性干细胞。该细胞在无饲养层、化学成分明确的iPSC维持培养基中培养，能够稳定增殖，并表现出与人类胚胎干细胞（hESC）相似的形态特征、细胞表型和基因表达模式。

Q:

iPSC克隆生长在孔板边缘，而孔板中央区域克隆稀少，这是什么原因？

A:

这种情况通常与几个常见因素有关，包括包被基质在孔板表面分布不均匀、接种时细胞悬液未充分摇匀导致细胞在局部聚集，以及培养箱内湿度不足造成孔板边缘区域相对干燥，这些都可能使细胞优先在边缘贴壁和生长。此外，如果孔板在传代前未能充分预湿，边缘区域的培养基蒸发较快也会影响细胞分布，建议在传代前先将新鲜培养基加入新孔板中置于培养箱内平衡一段时间，以达到充分预湿的效果。另外需特别注意，若您使用的是提前包被好并存放于4℃的培养板，存放时间过久可能导致孔板中央区域的包被液挥发变干，影响细胞在中央的贴壁能力，因此建议尽量使用新鲜制备或存放时间较短的包被板，并在使用前检查孔内是否有干涸痕迹。综合以上几点，逐一排查包被均匀性、接种摇匀操作、培养箱湿度以及板子预处理情况，通常能够改善克隆分布不均的问题。

Q:

细胞复苏后，镜下观察发现细胞边缘呈现不规则的“刺状”或毛刺样突起，这是否属于正常现象？是否意味着细胞状态已经变差？

A:

主要原因在于：细胞在复苏后需要重新贴壁和伸展，此时细胞骨架和膜结构尚未完全恢复，部分细胞会伸出丝状伪足或片状伪足，试图与邻近细胞建立连接，从而表现为边缘不规则的“刺状”外观。这并不直接代表细胞活力下降或状态恶化。一般情况下，随着细胞进一步贴壁生长，并经过 1～2 次传代后，细胞形态会逐渐恢复至典型的正常状态。建议您在此期间密切观察细胞密度、培养基颜色及漂浮细胞数量，若没有明显污染或大量漂浮死亡细胞，可按照常规换液和传代流程继续培养。

Q:

索码可提供哪些与 iPSC 建系相关的配套服务？

A:

1）PBMC 样本 → iPSC 重编程建系，并完成全套 iPSC 质控鉴定（含多能性标志物检测、核型分析、三胚层分化能力验证及外源因子清除确认）； 2）CRISPR‑Cas9 基因编辑服务：涵盖患者 iPSC 的突变修复、野生型 iPSC 的致病突变引入以及编辑后单克隆筛选与基因型鉴定； 3）细胞冻存保藏、克隆扩增等配套技术支持。

Q:

在索码完成患者 iPSC 建系后，后续可开展哪些科研思路？

A:

许多客户的项目以明确目标患者携带的致病突变为起点，采集患者外周血样本，完成 iPSC 重编程建系；部分客户甚至会将患者亲属（如父母、亲兄弟姐妹）的样本纳入研究，以获得等基因对照（Isogenic control）。后续科研思路主要包括以下方向： 1）疾病模型构建与表型及机制探究将患者来源的 iPSC 与健康对照 iPSC（以等基因对照为佳）定向分化为疾病相关的功能细胞（如神经元、心肌细胞、肝细胞等）。通过对比两组细胞在表型层面的差异，验证该致病突变是否足以引发细胞水平的功能异常，并进一步探究突变导致疾病的分子与细胞机制。 2）CRISPR 基因编辑策略单纯的患者‑健康人对比研究易受个体遗传背景差异干扰。为此，可对患者 iPSC 进行基因修复，获得校正后的等基因细胞系；亦可向正常 iPSC（尤其是等基因对照细胞）中敲入致病突变，构建突变型细胞系。若具备等基因对照 iPSC，二者遗传背景几乎完全一致，仅目标位点存在差异，可确凿证明所观察到的表型由该基因突变直接引起，排除个体间遗传背景混杂因素，是疾病机制研究的“金标准”实验设计。 3）下游延伸方向获得成套细胞系后，可进一步开展药物筛选、基因治疗靶点验证、类器官构建等转化研究。

Q:

如何实现iPSC/ESC在R2-01-01培养基与其他品牌培养基之间的相互转换？

A:

在切换培养体系前，需要确保细胞本身状态良好，没有分化、老化和生长迟滞的迹象。R2-01-01可以适应市面上大部分常用的培养基体系（如mTeSR和E8），切换至R2-01-01通常仅需在复苏或传代时添加Rock抑制剂（如Y27632），1-2代适应后即可完成切换。