1.将生长状态良好的细胞消化为单细胞或团块（具体方式由细胞类型决定），使用中和或稀释的方式终止消化。将细胞收集至离心管中，取样计数计算细胞总数。
2.离心，去除上清。
3. 根据计算得到的细胞数量，加入PluriCryo冻存液（2-8℃），吹打混匀后分装至冻存管中。通常推荐冻存细胞的密度在1×106-107cells/mL范围内。
4. 将冻存管直接置于-80℃冰箱中，24h 后移入液氮长期保存。
1.提前预热水浴锅和复苏所用的培养基。
2.从液氮中取出冻存管，置于干冰上，运输至细胞房内。
*推荐将冻存管在干冰上静置10-20分钟后再进行复苏，防止其中液氮突然受热爆炸。若没有干冰，复苏前应先在操作台内将冻存管盖拧开再重新拧紧，以释放其中压力。
3. 用镊子夹住冻存管，将其下半截管身没入37℃水浴锅中，轻轻摇晃，待其内容物融化至仅剩小片冰晶时，用75%酒精喷洒管身，转入操作台内。
4. 用1mL枪头吸取适量培养基，逐滴加入冻存管内。将细胞悬液转移至15mL离心管内，加入冻存液5-10倍体积的培养基，混匀后离心，去上清。
5. 加入培养基重悬细胞沉淀，混匀后计数，按预定比例接种细胞。
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