iPSC单细胞传代时使用步骤（以六孔板一孔为例）

1.吸除培养皿/板中的旧培养基，用 DPBS （无钙、镁）轻轻洗涤细胞 1-2 次。

2.加入1mL预热至室温的Gentlease（切勿在37℃水浴锅预热Gentlease），在37℃培养箱孵育约5分钟。在镜下观察细胞，若大部分细胞仍然贴壁，可适当延长消化时间。

注：Gentlease可以通过直接稀释终止消化，但对于关键实验或极为珍贵的细胞样本，我们仍然推荐采用更为稳妥的离心换液法来彻底排除任何微小的影响。推荐两种传代方法：

3.直接稀释法：

3.1 加入2倍体积的iPSC维持培养基（含CEPT）。

3.2 将细胞收集至15mL离心管中，用移液器轻柔吹打，使其分散成单细胞悬液，计数。

3.3 按合适密度接种至包被好的孔板中。（见索码干细胞铺底液或玻连蛋白使用说明）

3.4 放入 37℃、5% CO₂培养箱培养。

3.5 24小时后更换为不含 CEPT 的新鲜iPSC维持培养基（货号：R2-01-01）。

3.6 后续按常规培养流程进行换液和传代。

4.离心换液法：

4.1 加入2倍体积的DPBS（无钙、镁）。

4.2 将细胞收集至15mL离心管中，用移液器轻柔吹打，使其分散成单细胞悬液，计数。

4.3 300g离心3分钟，弃上清。

4.4 用适当体积的iPSC维持培养基（含CEPT）重悬，接种至包被好的孔板中。

4.5 放入 37℃、5% CO₂培养箱培养。

4.6 24小时后更换为不含 CEPT 的新鲜iPSC维持培养基（货号：R2-01-01）。

4.7 后续按常规培养流程进行换液和传代。