iPSC单细胞传代时使用步骤（以六孔板一孔为例）

1.吸除培养皿/孔板中的旧培养基，用 DPBS（无钙、镁） 轻轻洗涤细胞1-2次。

2.加入1mL预热至室温的UniZyme，在37℃培养箱孵育约5分钟。或加入1mL在37℃预热好的UniZyme，在37℃培养箱孵育约2分钟。

3.在镜下观察细胞，若大部分细胞仍然贴壁，可适当延长消化时间。

4.用移液器轻柔吹打，或轻拍容器侧面使细胞脱壁。将消化完毕的细胞收集至预先准备好的含5mL iPSC维持培养基（货号：R2-01-01）或DMEM/F-12的15mL离心管中。使用离心管中的培养基润洗一次容器表面以尽可能多地收集细胞。

5.离心3分钟，弃上清。

6.用1mL iPSC维持培养基（含CEPT）重悬，计数。

7.按合适密度接种至包被好的孔板中。（见索码干细胞铺底液或玻连蛋白使用说明）

8.放入 37℃、5% CO₂培养箱培养。

9.24小时后更换为不含 CEPT 的新鲜iPSC维持培养基（货号：R2-01-01）。

10.后续按常规培养流程进行换液和传代。