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Q&A
Q:
iPSC细胞传代时的注意事项
A:
首先观察细胞汇合度至80%左右,且细胞状态良好可进行传代。一般情况下3-6天传代一次,即使克隆团较小、汇合度不足,也不建议连续培养7天以上。或者细胞汇合度较低,但干细胞集落过大,中央细胞生长不良也要进行传代。传代比例可根据细胞生长状态和实验需要按1:5-1:10进行传代。消化时在显微镜下观察细胞克隆出现裂缝时说明消化完全,应终止消化。若传代接种后的细胞多为单细胞而非小的细胞团块或细胞活率低,建议前24h内加入Y27632帮助细胞贴壁和存活,18-24h后更换不含y的新培养基,此后每天换液。
Q:
iPSC细胞复苏接种时发现大多为单细胞形态,24h后几乎不贴壁,是什么原因,该如何处理?
A:
我们公司发货的iPSC细胞一般为团块传代冻存,接种时细胞大多为单细胞形态主要原始是在复苏离心后吹打过度,导致细胞团块被吹散,iPSC在单细胞形态存活率较低,贴壁难度较高,如果在复苏24小时后发现细胞活率低,贴壁较少也要立即换液,iPSC的增值能力非常强大,即使只是少量细胞贴壁也可能养起来,但如果不及时换液就一定救不回来。
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